激光共聚焦顯微鏡是80年代發(fā)展起來的一項(xiàng)劃時(shí)代意義的高科技新產(chǎn)品，與傳統(tǒng)顯微鏡相比，激光激光激光共聚焦顯微鏡具有高分辨率，高靈敏度和高放大倍率。隨著軟件開發(fā)和應(yīng)用技術(shù)的發(fā)展，激光共聚焦顯微鏡已成為形態(tài)學(xué)，分子細(xì)胞生物學(xué)，神經(jīng)科學(xué)，藥理學(xué)和遺傳學(xué)領(lǐng)域的新一代強(qiáng)大的研究工具。

激光共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對標(biāo)本內(nèi)焦平面上的每一點(diǎn)掃描,標(biāo)本上的被照射點(diǎn),在探測針孔處成像,由探測針孔后的光電倍增管( PM T)或冷電耦器件( cCCD)逐點(diǎn)或逐線接收,迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖象。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點(diǎn)同時(shí)聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點(diǎn)不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖象是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,克服了普通顯微鏡圖象模糊的缺點(diǎn)。

而通過激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行樣品制備時(shí)，激光共聚焦顯微鏡樣品制備是檢測前的關(guān)鍵步驟。樣品需要用熒光探針（單，雙和三）標(biāo)記。標(biāo)本可以是固定的或活組織，或固定或活的貼壁培養(yǎng)。細(xì)胞應(yīng)在共聚焦特殊培養(yǎng)皿或蓋玻片，懸浮細(xì)胞，萼片或滴劑和蓋玻片上培養(yǎng)，覆蓋。樣品最大厚度約1~2mm，蓋玻片厚度應(yīng)小于0.17mm，滑塊厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間，表面光滑，厚度均勻，并且沒有明顯的干擾熒光。固定樣品通常用密封片密封，通常使用通過使用pH 8.5-9的PBS制備的甘油密封。

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