熒光是生物和分析顯微鏡中最常用的物理現(xiàn)象之一,主要是因為它具有靈敏度高、特異性強的特點。熒光是冷發(fā)光的一種形式。熒光顯微鏡甚至允許用戶決定單個分子種類的分布、數(shù)量及其在細胞內(nèi)的位置??梢詫崿F(xiàn)共區(qū)域化和相互作用的研究,離子濃度以及觀察細胞內(nèi)間的胞吞和胞吐過程。借助超分辨率熒光顯微鏡,甚至可以成像亞分辨率結(jié)構(gòu)。而在熒光分析中常用汞燈作激發(fā)光源,根據(jù)汞蒸氣壓的不同可分為以下幾種:
一、低壓汞燈:汞蒸氣,可發(fā)射出很強波長的射線,壽命很長,可長時間連續(xù)工作,射線對眼睛有害,不眼睛時不可長時間注視。二、高壓汞燈:高壓汞燈又叫高強度紫外線燈,汞蒸氣為1-數(shù)個大氣壓,可見炮區(qū)的譜線增強,在紫外光區(qū),波長為365nm的光線最強。三、中壓汞燈:可以發(fā)射一系列汞線組成的不連續(xù)光譜,除254nm波長以外,多數(shù)譜線都可作為校正波長使用。此外,還有超高壓汞燈、汞-氙燈、汞-鋅燈等。
四、氫灑和氘燈:是燈泡中加氫蒸氣,經(jīng)閉合放電產(chǎn)生160-350nm波長的光,氫朋激發(fā)態(tài)返回的基態(tài)時,就發(fā)射了氫的連續(xù)光譜,在160nm以下為線樂譜,氫燈和氘燈性能相同,其壽命也比氫燈長,因玻璃吸收紫外線,故燈殼要用石英制作,或在燈泡出光處開一石英窗,此光源適用于紫外光區(qū)的測定。五、氙燈:光的輻射能強度很高,它可在220-1100nm之間發(fā)射很強的連續(xù)光譜,可用于紫外區(qū),可見光及近紅外區(qū)的測定,雖其輻射范圍廣,使用中在生產(chǎn)高熱的同晨有臭氧味,其壽命短,燈泡內(nèi)壓較大,如日立牌650-60型熒光分光光度計,氙燈平時約有7個大氣壓,點燃后可達30個大氣壓,故使用進應(yīng)注意。
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